فصل الدنا



× نضيف العينة في انبوب نضيف عليها انزيم
SDS- proteinase K


الغرض منه ترسيب المكونات حول شريط الـDNA بدون التأثير على الشريط نفسه
..





× نضيف المحلول المنظم للعينة ونضعها في انبوب الطرد المركزي ..وهذا شكلها :
 




×
نخلطها بواسطة جهاز الـVortex لمدة 10 دقائق..


وهذا الـVortex shaker:



× نضعها في جهاز الطرد المركزي لمدة 10 دقائق..وهذا هو:




×
نخرجها من الجهاز وسينتج 3 طبقات.. راسب-ورائق.. نتخلص من الرائق ونأخذ
الراسب(الراسب يحوي الشريط النووي)


× نضيف على الراسب مايلي: EDTA +10%SDS +
proteinase K.


× نحفظ العينة في
حمام مائي عند درجة حرارة 37 ºم ليلة كاملة .. تحت التحريك المستمر
..

ويقوم الجهاز بتحريك العينة وحفظ حرارتها ..
وهذا نموذج من الجهاز:




×
نضيف الفينول ونرج العينة بجهاز الـVortex مره اخرى لمدة 10 دقائق..



× نضع العينة بجهاز الطرد المركزي –أيضاً مره أخرى- لمدة 10 دقائق ثم نحصل على
طبقتين..


× نأخذ الرائق ونضيف
لها الكلروفورم.. ثم طرد مركزي لمدة 5 دقائق..ثم ناخذ الراسب الناتج..



× نضيف للراسب الايثانول ..ثم طرد
مركزي..نتخلص من الرائق.. وسنلاحظ شريط الـ DNA على جدار الانوب..



× نقلب الانبوب ليجف الـ DNA ثم نعيد
تذويبه بإضافة محلول الـ EDTA


وهذا شكله النهائي..



\ مثل ماهو ملاحظ واضح بالعين المجرده ..لكن.. لايجي في بالكم هذا شريطين ملتفين من
الـDNA ..


بل هذا بوليمر –او جزئ ضخم جداً- ملتف بعدّة
مكونــات
\


أضف تعليقاً

إملأ الحقول أدناه بالمعلومات المناسبة أو إضغط على إحدى الأيقونات لتسجيل الدخول:

WordPress.com Logo

أنت تعلق بإستخدام حساب WordPress.com. تسجيل خروج   / تغيير )

صورة تويتر

أنت تعلق بإستخدام حساب Twitter. تسجيل خروج   / تغيير )

Facebook photo

أنت تعلق بإستخدام حساب Facebook. تسجيل خروج   / تغيير )

Google+ photo

أنت تعلق بإستخدام حساب Google+. تسجيل خروج   / تغيير )

Connecting to %s