قراءة تسلسل المادة الوراثية ( نظريا)

افتراضي قراءة تسلسل المادة الوراثية ( نظريا) ..

مكتشف هذه الطريقة عالم بيرطاني يدعى سانجر


وتسمي chain termination method طريقة قطع السلسلة ، و مبدأها العلمي بسيط
جدا و لكي نفهم المبدا ركزوا في التالي :



اللبنات الأساسية لبناء المتسلسلة الوراثية Sequence عبارة عن


A
C
G
T


و لنأخذ نظرة عن التركيب الجزيئي لهذه القواعد



في الحالة الطبيعية DnTPS تدعم عملية التوصيل elongation


و لكن في الحالة الثانية بعد نزع ذرة الأوكسجين في DDnTPS فأنها لا تدعم
التوصيل ببعض و يحصل ايقاف لتركيبة السلسلة . طيب حط في الحسبان



فلو استخدمنا تفاعل PCR بالظروف التالية



A C T عبارة عن DnTPS و لكن اضفنا معها G على أنها DDnTP لا تدعم الارتباط
أي لن يرتبط بعدها اي قاعدة و ستوقف التفاعل على التمبلت او خيط DNA
الموجود



التجربة :



المواد :


منتج PCR قد سبط عزله بطول معين 100 او 300 او 1000 قاعدة متسلسلة bp


TaqPol انزيم البلمرة


بفرز او محاليل منظمة للتفاعل


قواعد سليمة من ACT


قاعدة منقوصة من G


برايمر أو بادئة خاصة بالمنتج


نعمل الماستر مكس و نحطها في جهاز الدوران الحراري Thermal Cycler



سيظهر لدينا منتج بأطوال متباينة يتوقف عند كل قاعد G


كما في الصورة




سؤال لو عملنا فصل كهربي على الجل أيها سيعبر اسرع ؟



الأقل وزنا أي الأقرب في السلسلة



اذن لو قمنا بأربع تفاعلات في كل تفاعل نغير قاعدة ، سنتج لنا منتجات PCR
مفصوله بأصول معينة و منها نملأ الفراغ






هذا للطريقة التقليدية



و اما بالنسبة للطريقة الآليه مثل جهاز ABI prism



فيتم دمج الأصباغ مع بعضها و كل مكان يتوقف فورا عند ارتباط قاعدة DDnTPS و
لأن المخلوط أساسا


مكون من DnTPS و أيضا DDnTPS فأيها يرتبط يستمر و يتوقف التفاعل








أضف تعليقاً

إملأ الحقول أدناه بالمعلومات المناسبة أو إضغط على إحدى الأيقونات لتسجيل الدخول:

WordPress.com Logo

أنت تعلق بإستخدام حساب WordPress.com. تسجيل خروج   / تغيير )

صورة تويتر

أنت تعلق بإستخدام حساب Twitter. تسجيل خروج   / تغيير )

Facebook photo

أنت تعلق بإستخدام حساب Facebook. تسجيل خروج   / تغيير )

Google+ photo

أنت تعلق بإستخدام حساب Google+. تسجيل خروج   / تغيير )

Connecting to %s